心脏组织在 HPM 010（Balzers，Lichtenstein，EU）中被快速冷冻固定。冷冻肌肉要么在冷冻水合状态下解剖，要么进行冷冻替代，用 2.3 M 蔗糖灌注，重新冷冻并在冷冻超薄切片机（Leica，维也纳，A，欧盟）上分离。或者，将冷冻组织切碎以获得匀浆。
用无菌手术刀将新鲜心脏组织切成小方块，放在底部涂有 Matrigel 的培养皿中，或放在天然心脏组织切片中，并加入添加了血清、心脏组织粉和抗生素的 DMEM。原代培养物在 37°C、10% CO2和饱和湿度的培养箱中生长。为了保存，组织培养物被注入 DMSO 或甘油并逐渐冷冻以保持活力。
、冷冻和冻干。它们在再水化后用作营养培 约旦手机号码数据 养基的补充剂或通过电泳和印迹进行检查。
所有这些方法都确保了心肌蛋白的抗原性和结构的天然状态的保存。所有样品均采用流式细胞术 (FCM)、多光子荧光光谱 (MFS)、核磁共振波谱 (NMRS)、能量色散 X 射线光谱 (EDXS) 进行分析[38, 45]。
异质特异性四价抗体的生物工程
异质特异性四价抗体是按照[45]的描述进行生物工程改造的。简而言之，从患有癌症和心肌梗塞的患者的血液中分离出 B 细胞。来自这些患者的汇集的 B 细胞被用于分离 mRNA，然后对其进行逆转录以生成人类 cDNA 文库。将 CD 插入含有 CMV 启动子下螯合编码序列并以 polyA 终止的质粒中，在人类骨髓瘤或 B 细胞中扩增和表达。基因改组增加了文库的多样性。通过抗体免疫沉淀纯化天然 CD34、CD117、CD133，然后用生物素、地高辛或荧光素进行修饰。它们被安装在浸透了抗生物素、抗地高辛或抗荧光素的托盘上，作为选择表达文库的诱饵。